Группа крови – это оригинальные антигенные характеристики клеток крови (эритроцитов), которые определяются с использованием способов распознания групп белков и углеводов, содержащихся в оболочке эритроцитов. Определить группу крови – обязанность каждого человека, для этого необходимо сдать анализ. На сегодняшний день в любой больнице или поликлинике можно сдавать свою кровь на исследование, поэтому трудностей с проведением данной процедуры не возникает, и каждому важно знать, как определить группу крови и откуда берут материал на исследование.

Группа крови в течение всей жизни у каждого человека остается неизменной. Люди с одним типом могут отличаться от людей с другим по причине того, что у каждого человека разное количество агглютиногенов A и B в кровяных клетках, а также совсем разное количество агглютининов α и β, которые содержатся уже в амбоцептере крови.

В природе существует несколько видов групп крови:

• 0(I) – эта содержит только агглютинины α и β, агглютиногенов нет.
• A(II) – содержится только агглютинин β и агглютиноген A.
• В(III) – агглютинин α и агглютиноген B.
• AB(IV) группа крови - содержит агглютиногены A и B, агглютинины отсутствуют.

Откуда появилась классификация? Впервые открыл все существующие типы крови у людей врач из Австрии. Это открытие позволило ученому получить премию А.Нобеля по медицине в 1930 году. Также открытие групп помогло остановить смертельные исходы в процессе переливания крови от одного человека другому . Человек, которому необходимо сделать переливание называется реципиентом. Человек же, что сдает свою кровь, называется донором. Наиболее подходящим типом для реципиента будет кровь идентичная его типу.

Помимо существующих антиглютиногенов A и B в кровяных клетках можно наблюдать и другие антигены, например, резус-факторы. В ситуации, если кровь не совместима по резус-фактору, то проводить переливание категорически запрещено. Впоследствии могут возникнуть плачевные случаи, вплоть до летального исхода.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

• по изогемагглютиновым сывороткам;
• по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
• метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах 15-25 °C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с капельками сыворотки (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

Отличительной и главной особенностью этого метода является то, что эритроциты группы 0(I) главные, т.к. они не содержат антигенов. Эта особенность делает невозможным соединение эритроцитов с любой из сывороток.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

Погрешности при проведении исследования

Определение группы крови описанными тестами может осложниться появлением некоторых характерных ошибок. Все возможные ошибки можно классифицировать на три группы: технические, биологические и сывороточные.

К техническим ошибкам относятся поспешная оценка результатов, несоблюдение режима нужной температуры, отсутствие маркировки платин, неверное соотношение количества крови и сыворотки. Биологические ошибки появляются в тех случаях, когда красные кровяные тельца соединились со всеми сыворотками, на исследование берут инфицированную биожидкость, происходит полная панагглютинация, неактивные антигены A и B. Сывороточные ошибки могут быть, если берут инфицированную, просроченную или сыворотку с титром ниже 32.

Во избежание указанных погрешностей нужно соблюдать строгие правила при проведении тестов на установление своей группы . Следует использовать разные тарелки (чистые и сухие), категорически нельзя смешивать компоненты одной и той же палочкой, следить за сроками и температурой, ну и конечно, процедура определения группы крови не должна проходить в домашних условиях, а только в медицинском учреждении специалистами.

Таким образом, только исследования в лабораторных условиях помогут ответить на главный вопрос, как узнать группу крови. И никакая иная информация или советы других людей не позволят узнать свою группу, особенно в домашних условиях. Поэтому для тех, кто задается вопросом, какая у меня группа крови, для проведения правильного исследования с точными результатами необходимо специальное оборудованное помещение, где будут соблюдаться все требования, а не домашние условия с использованием подручных предметов.

Общие сведения. Успехи трансфузионной терапии тесно связаны с успехами изосерологии - науки об антигенах, антителах и группах крови. К. Ландштейнер, изучая серологические свойства крови, установил, что эритроци­ты человека содержат антигены человека. Одновременно с этим открытием им была выявлена строго абсолютная закономерность содержания в плазме крови естественных антител: против эритроцитарного антигена у данного человека в плазме никогда не бывает соответствующего плазменного антитела.

На основании этих данных Ландштейнер в 1901 г. ввел понятие о групповой принадлежности крови и разделил всех людей по серологическим особенностям эритроцитов на три группы. В 1907 г. Я. Янский доказал, что у людей закономерно встречаются четыре группы крови.

В 1910 г. предложили назвать антигены эритро­цитов человека агглютиногенами А и В, а соответствующие антитела анти А и анти В - агглютининами α и β.

В 1928 г. была принята классификация групп крови по Янскому:0(I), А(II),B(III),AB(IV).

В основе определения групп крови лежит реакция изогемагглютинации, т. е. реакция взаимодействия антител плазмы с соответствующими антигенами эритроцитов, вследствие которой наблюдается склеивание эритроцитов в виде зерен или песчинок.

Агглютиногены и агглютинины крови.

Агглютиногены крови, по структуре полисахариды, локализуются в оболочке клеток крови. В настоящее время в крови человека обнаружено более 100 различных агглютиногенов, которые группируются в антигенные системы: системаABO,Rh-hr,MN, Р, Даффи, Льюис и др.

Оценивая клиническое значение различных агглютиногенов, следует выделить основные: антигены системы АВО и Резус-фактор, которые чаще всего бывают причиной посттрансфузионных осложнений. Поэтому указанные факторы всегда учитываются при переливании крови. Возникновение осложнения при совместимости данных фак­торов указывает на несовместимость крови донора и реципи­ента по другим системам. В таких случаях требуется инди­видуальный подбор крови донора, который должен произ­водиться в отделении или на станции переливания крови.

Агглютиноген «0» является слабым антигеном и выяв­ляется только специальными сыворотками. Даже при по­вторном введении его в организм антител к нему практиче­ски не образуется.

Агглютинины представляют собой гамма-глобулины (иммуноглобулины) плазмы крови. Агглютинины делят на естественные - генетически обусловленные, существующие в течение всей жизни, например антитела анти А и анти В, и иммунные, которые появляются у людей в результате иммунизации чужеродными агглютиногенами, например антитела анти-Резус.

Итак, под группами крови подразумевают определённые различные сочетания взаимосвязанных антигенов (агглютиногенов) эритроцитов и антител (агглютининов) плазмы крови.

В табл. 3. представлены основные агглютиногены и агглютинины системы АВ0 , характеризующие серологические особенности каждой из четырёх групп крови.

Таблица 3. Агглютиногены и агглютинины, характерные для каждой группы крови

Группа крови по системе АВ0	Агглютиногены эритроцитов	Агглютинины плазмы

По данным М. А. Умновой (1964), среди населения чаще встречается А(II) группа крови - 37,8%, затем 0(I) - 33,5%, реже В(III) иAB(IV) - 8,2%. Групповые особенности крови человека являются его постоянным признаком; они возникают во внутриутробном периоде развития, сохраняются в течение всей жизни и передаются по наследству.

Если при переливании крови у человека произойдет встреча одноименных агглютиногенов и агглютининов (А и α, В и β), то возникает агглютинация, а затем гемолиз эритроцитов, что является тяжелым осложнением, которое нередко заканчивается летальным (смертельным) исходом.

Система Резус. Учащение переливания крови в период, когда существование групп крови по системе АВ0 уже было известно, но не была еще открыта система «Резус», сопровождалось ростом числа посттрансфузионных осложнений, возникавших, несмотря на переливание крови, совместимой по группам АВ0. Причина этих реакций была определена Ландштейнером и Винером (1937- 1939). Они установили, что введе­ние эритроцитов макак вида «Резус» кроликам сопровож­дается выработкой у последних антител, которые агглютинируют в 100% случаев эритроциты обезьян «резус».

Ввиду этого, указанные антитела назвали антителами антирезус. Затем было установлено, что сыворотка крови этих кроликов, содержащая антитела антирезус, агглютинирует эритроциты 85% людей белой расы. Эритроциты 15% людей этой расы такой сывороткой не агглютинируются. Из этого сделан вывод, что у 85% людей эритроциты содержат антиген «Резус» (Резус-фактор), свойственный обезьянам «Резус». В настоя­щее время Резус-фактор принято обозначать символами: Rh(D) или простоD. Позже обратили внимание на то, что женщины с группой 0 (I), родившие мертвый плод, при переливании им крови мужей 0 (I), как правило, дают типичную посттрансфузионную реакцию гемолитического типа. Исследования показали, что эти женщины отно­сились к резус-отрицательному типу и содержали в крови антитела «анти резус», которые вызывали гемолиз перели­вавшейся им совместимой в групповом отношении крови мужей. Было сделано заключение, что резус-отрицатель­ные женщины могут иммунизироваться эритроцитами их резус-положительного плода, унаследовавшего этот тип крови от резус-положительного отца. Приблизительно в это же время было установлено, что резус-отрицательные люди (мужчины и женщины) могут иммунизироваться резус-положительной кровью, причем способ введения ее в организм не имеет существенного значения.

Антитела против антигенов системы «Резус», в частности антитела анти Резус (антитела анти-D), возникают только в результате иммунизации при переливании резус-несовместимой крови (гемотрансфузий) или при беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом. При этом антигены или эритроциты плода проникают через плацентарный барьер в кровоток матери и вызывают сенсибилизацию ее организма, проявлением которой является выработка антител «анти Резус». При накоплении в опре­деленной концентрации, антитела анти-Dиз кровотока матери поступают в организм плода, фиксируются на его эритроцитах и разрушают (гемолизируют) их. В результа­те возникает так называемый «резус-конфликт» - част­ный случай биологического конфликта матери и плода, обусловленный резус-несовместимостью. Следует отме­тить, что биологический конфликт из-за несовместимости крови матери и плода по группам кровиAB0 (AB0-конфликт) встречается реже и протекает доброкачествен­нее. Чаще всего, он возникает в комбинации: мать - группа 0 (I) - плод - группа А (II). При этом групповые агглютинины (антитела анти А) разрушают эритроциты плода группы А(II).

Антитела «антирезус» сохраняются, как правило, пожизненно. Титр этих антител может снижаться, но при пов­торном контакте с антигеном (переливание резус-несовместимой крови или резус-несовместимая беременность) продуцирование их в сенсибилизированном организме резко возрастает.

В России используется двойное обозначение групп крови - 0(I), А(II), В(III) и AB(IV).

Принадлежность человека к той или иной группе крови не зависит от возраста, пола, расовой принадлежности. Группа крови передается по наследству в соответствии с законами генетики. Она является индивидуальной биологической особенностью человека, которая определяется уже в раннем периоде эмбрионального развития и не изменяется в течение всей последующей жизни.

Группа крови системы АВ0 - это определенное сочетание врожденных групповых антигенов эритроцитов, содержащихся в этих клетках крови, и антител к ним, находящихся в плазме (сыворотке).

Вещества, находящиеся в клетках крови, представляют собой антигены (агглютиногены), вызывающие агглютинацию (склеивание) клеток крови при встрече и взаимодействии с одноименными антителами плазмы, получившими название агглютининов. Агглютиногены клеток крови обозначаются латинскими буквами А и В, агглютинины - соответственно греческими буквами α (антитела «анти А») и β (антитела «анти В»). Это нашло отражение в буквенном обозначении групп крови.

Кровь любого человека может одновременно содержать только разноимённые друг другу агглютиногены и агглютинины или не иметь каких-то из них. В противном случае должна произойти агглютинация (склеивание) клеток крови.

В зависимости от сочетания агглютиногенов и агглютининов различают четыре группы крови по системе АВ0 - основной и наиболее важной антигенной системе клеток крови человека.

В крови I группы имеется так называемый «нулевой» (0) агглютиноген, агглютиногены А и В отсутствуют. Соответственно в плазме (сыворотке) находятся оба агглютинина - α и β. Полная формула крови I группы - 0αβ(I).

В крови II группы имеются агглютиноген А и агглютинин β. Полная формула II группы крови - Аβ(II).

В крови III группы имеются агглютиноген В и агглютинин α. Полная формула III группы крови - Вα(III).

В крови IV группы имеются оба агглютиногена - А и В и отсутствуют агглютинины. Полная формула IV группы крови - AB 0 (IV).

У 88 % людей с группой крови А(II) определяется разновидность агглютиногена А - А 1 , а у 12% имеется агглютиноген А 2 . Они отличаются друг от друга по силе агглютиногенной способности. Значительно сильнее она выражена у разновидности А 1 . Соответственно, и группа крови AB(IV) также имеет две подгруппы: A 1 B(IV) и A 2 B(IV). Разделение на подгруппы имеет большое практическое значение при определении группы крови. Не зная этого, можно ошибочно определить группу крови 0(I) - вместо А(II), и В(III) - вместо AB(IV). Это связано с тем, что при наличии слабого агглютиногена А 2 агглютинация при определении группы крови наступает поздно (иногда на 4 - 5 минуте) и выражена очень слабо.

Групповая принадлежность крови системы АВ0 определяется реак­цией агглютинации при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов (моноклональных антител).

Для определения групп крови применяют иммунную реакцию – реакцию гемагглютинации.Реакция гемагглютинации - склеивание и выпадение в осадок, в виде комочков, эритроцитов (несущих антигены) под действием одноимённых антител сыворотки крови. Групповая агглютинация – специфическая агглютинация клеток, наступающая под действием антител, направленных к групповым антигенам этих клеток. Антигены, участвующие в реакции агглютинации называют агглютиногенами. Антитела, направленные против одноимённых антигенов эритроцитов и обладающие свойством их агглютинировать, называютгемагглютининами (гемагглютинирующими антителами).

Определение группы крови системы АВ0 возможно тремя способами

При помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

При помощи цоликлонов .

= Перекрёстным способом, т.е. одновременно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток (или цоликлонов) и стандартных эритроцитов . При этом способе, так же как и при первых двух, определяют наличие или отсутствие эритроцитарных антигенов и, кроме того, врачи–лаборанты (в лаборатории) устанавливают наличие или отсутствие групповых антител в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов

Для проведения иммуносерологических исследований (определение групповой принадлежности крови системы АВ0, Резус – принадлежности, проведение проб на индивидуальную совместимость крови донора и сыворотки реципиента) используют кровь (эритроциты и сыворотку) реципиента не более двухдневного срока хранения при температуре +2 0 …+6 0 (при условии отсутствия гемолиза в пробирке).

А. Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные сыворотки для определения групп крови изготавливаются учреждениями службы крови (отделе­ниями, станциями и институтами переливания крови). Они готовятся из сыворотки крови человека и содержат в различных комбинациях и в достаточном количестве груп­повые изоагглютинины α и β, которые вступают в реакцию антиген - антитело с антигенами системы АВ0 исследуе­мых эритроцитов, склеивая (агглютинируя) их.

В нашей стране при определении групп крови обяза­тельно использование стандартных сывороток четырех групп: 0 (I), А (II), В (III),AB(IV). Последняя не содержит групповых изоагглютининов и не должна давать реакции агглютинации (изосерологически нейтральна). Сыворотки окрашены и имеют в перечисленной последовательности следующую цветовую маркировку: бесцветная, синяя, красная, желтая. При нанесении стандартных сывороток на плоскость, где определяется группа крови, необходимо соблюдать такую же последовательность расположения цветов (контроль верности нанесения на плоскость стандартных сывороток). Стандартные сыворотки выпускают­ся учреждением-изготовителем в герметически закрытых флакончиках (как для инсулина) или ампулах. Этикетка на этих сосудах со стандартной сывороткой имеет надписи: наиме­нование учреждения, выпустившего сыворотку; групповая принадлежность данной сыворотки приведенным выше шифром - 0 (I),A(II) и т. д.; титр антител, количество (обычно по 2-5 мл) сыворотки, дата истечения срока годности; серия, обозначающая порядковый номер изгото­вления в текущем году. Помимо этого на этикетках нане­сены цветные полосы, число и цвет которых соответствуют обозначению групповой принадлежности сыворотки.

Например, сыворотка 0 (I) не окрашена и поэтому полос не имеет, сыворотка А (II) имеет две полосы синего цвета, сыворотка В (III) - три красные и АВ (IV) - четыре желтые полосы. Титром сыворотки считается ее максимальное разведение, при котором невооруженным глазом видна реакция агглютинации; его величина гарантируется учреждением - изготовителем сыворотки.

Определение групп крови производится в хорошо осве­щенном помещении при температуре +15 ... +25 "С.

Используются любые белые пластинки (тарелки, пластик) со смачиваемой поверхностью (на которых не растекаются капли сывороток) или специальные планшеты. На верхнем крае пишется фамилия и инициалы человека, у которого определяется группа крови. Специальные пластины имеют над лунками обозначения, согласно которым наносятся стандартные сыворотки. На приспособленных для определения группы крови пласти­нах по верхнему краю слева направо наносят надписи: О (I), А (II), В (III) и при необходимости - АВ (IV). Под соответствующими обозначениями в два ряда наносятся разные серии стандартных сывороток. В верхнем и нижнем рядах одногруппные сыворотки должны быть различных (не совпадающих) серий. То есть, используются по две серии сывороток каждой группы. Каждая сыворотка наносится отдельной пипеткой (чаще всего используют глазные пипетки), поэтому пипетки должны маркироваться (0, А, В, АВ) и нахо­диться только в своих флакончиках (ампулах). Для каждого флакончика сыворотки выделяется отдельная маркированная пипетка, которая после нанесения сыворотки на пластинку сразу же опускается в ту ампулу с сывороткой, из которой была взята. На плоскости, рядом с каплями стандартной сыворотки, палочкой (или уголком предметного стекла) наносятся капельки исследуе­мой крови; соотношение «сыворотка - кровь» должно быть 10:1. Ориентировочно капля стандартной сыворотки должна быть равна величине копеечной монеты, капелька крови - величине головки портняжной булавки (кровь для исследования может быть взята из пальца, вены, взвеси эритроцитов (со дна пробирки), из запаянной трубки контейнера с гемотрансфузионной средой.

Капля крови должна быть примерно в 10 раз меньше капли стандартной сыворотки (соотношение 1:10), с которой она смешивается сухой стеклянной палочкой (уголком предметного стекла). После размешивания капель в равномерно красный цвет пластинку покачивают, оставляют на 1 -2 мин в покое, а затем снова периодически покачивают. Не ранее чем через 3 мин в капли, в которых наступила агглютинация (невооружённым глазом видны «песчинки», «зёрнышки»), добавляют по 1 капле (0,05 мл) физиологического раствора NaCl. После внесения физиологического раствора ложная агглютинация исчезает, истинная - остается без изменения или усиливается. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10 - 30 секунд, наблюдение следует продолжать до истечения 5 минут, после чего делается заключение о группе крови.

Реакция гемагглютинации может быть положительной (наличие агглютинации) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Результаты в каплях с сыворотками двух разных серий одной и той же группы крови должны совпадать. Результаты определений могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций:

1) если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к группе 0(I);

2) если сыворотки групп 0αβ(I) и Вα(III) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аβ(II) - отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе А(II);

3) если сыворотки групп 0αβ(I) и Аβ(II) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вα(III) - отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе В(III);

4) если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, для исключения неспецифической агглютинации, необходимо провести дополнительное исследование с сывороткой (одной серии) AB0 (IV). Если реакция с этой сывороткой будет отрицательная, то исследуемая кровь действительно относится к группе AB(IV).

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток приведена в таблице:

Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток

Группа крови	Сыворотка 0αβ(I) - анти-А+B	Сыворотка Aβ (II) - анти-B	Сыворотка Bα (III) - анти-A	Сыворотка AB0 (IV)

Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.

Ошибки при определении групп крови системы АВО возникают в результате нарушения инструкции.

Основные причины ошибок:

нарушение порядка нанесения стандартных сыворо­ток, что может привести к неправильной трактовке полу­ченных результатов;

изменение активности или специфичности сыворо­ток вследствие того, что при нанесении их на планшет из флакончиков (ампул) пользуются одной пипет­кой или смешивают капли сыворотки и крови одной стеклянной палочкой (одним уголком предметного стекла);

снижение активности сывороток в результате наруше­ния режима хранения (необходима средняя температура хранения +4...+6 °С);

потеря специфичности вследствие инфицирования или повышение вязкости сывороток от высыхания при хранении их в открытых флакончиках (ампулах);

нарушение пропорции сыворотка - кровь (10:1);

исключение из методики определения групп крови физиологического раствора или стандартной сыворотки АВ (IV) группы;

преждевременный или, наоборот, поздний учет результатов определения групп крови (учет должен произ­водиться по истечении 5 мин с момента перемешивания капель).

Каждый человек - носитель генетически наследуемых характеристик, неизменных при естественных условиях, или определенного типа крови. Группа крови - отличительный признак белков, углеводов, гликопротеинов, гликолипидов, формирующихся на поверхности эритроцитов и носящих название «антиген». Составляя часть мембраны красных форменных элементов, антигены обнаруживают себя у всех представителей рода человеческого.

В медицине классифицируют множество разновидностей эритроцитарных групповых антигенов, то есть разные люди могут обладать одинаковым антигенным набором. Исходя из типологии антигенов, различают около трех десятков систем групп крови, таких как АВ0, MNS, Lutheran, Rh, Duffy, Colton и др.

Современная медицина пользуется двумя - АВ0 и Rh, играющими решающую роль при трансфузии. Подробнее рассмотрим в данной статье обозначенные системы группы крови «а-бэ-ноль» и «резус-фактор».

Система группы крови AB0

Открытию группы крови по системе АВ0 мы обязаны австрийскому иммунологу Карлу Ландштейнеру. Именно он сделал вывод, что одинаковая с виду кровь различается эритроцитарными свойствами. Жидкую подвижную соединительную ткань он распределил на три группы, обозначив их как A, B, 0. Позднее чешский врач Я. Янский открыл дополнительную группу AB и предложил обозначать типы крови с помощью цифр I, II, III, IV.

С этих пор трансфузия (переливание) считается эффективным терапевтическим методом, активно используемым при лечении многих болезней.

С 1928 году гигиенической Лигой Наций утверждено еще буквенное обозначение, по сей день принятое за основу классификации во всем мире: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).

Группы крови системы АВ0 позволили определить, почему переливание часто проходит с успехом, однако порой имеет летальный исход. Ландштейнер опытным путем доказал: при смешении эритроцитов одного пациента с плазмой другого, кровь свертывается, образуя хлопья. Эта способность плазмы (сыворотки) склеивать (агглютинировать) красные кровяные клетки получила название изогемагглютинация. Происходит эта реакция из-за присутствия в красных форменных элементах антигенов, именуемых агглютиногенами, которые обозначаются буквами A, B; а в сыворотке - природных антител (агглютининов), обозначаемых как a, b. Изогемагглютинация происходит только тогда, когда встречаются однобуквенные антигены и антитела, например, A-a, B-b.

Соответственно, в человеческой крови невозможно соединение одноименных агглютиногенов и агглютининов, поскольку способность агглютинировать эритроциты приведет к смерти.

Согласно теории Ландштейнера допускаются только четыре сочетания, исключающие встречу однобуквенных антигенов и антител, или 4 разновидности крови. Основанием данного разделения считается способность жидкой подвижной соединительной ткани содержать/не содержать антигены (агглютиногены) А, В и антитела (агглютинины) a (альфа или анти-А), b (бета или анти-Б).

Данная таблица отражает серологию по системе АВ0 группы крови:

Как видно из таблицы, в плазме имеются два вида гемолизинов, обозначаемых также буквами a, b. Соединение однобуквенных агглютиногенов и гемолизинов приводит к гемолизу (разрушению) эритроцитов. Данная реакция совершается при температуре 37-40°С, в то время при комнатном температурном режиме встреча одноименных антигенов и антител сопровождается агглютинацией без гемолиза.

Плазма обладателей II, III, IV типов содержит антиагглютиногены, оставившие красные кровяные тельца и ткани, отмечающиеся как агглютиногены – А, В.

Благодаря данной теории стала возможна трансфузия, протекающая без различного рода осложнений.

Существует общепринятое правило определения совместимости крови разных типов: плазма реципиента обязана принять донорские эритроциты. Поэтому у пациента, нуждающегося в переливании, важно учитывать значение агглютининов и гемолизинов, в то время как у отдающего кровь - агглютиногенов, присутствующих в красных форменных элементах.

Решая проблему сочетаемости группы крови по АВ0, необходимо смешать жидкую соединительную ткань с сывороткой, взятой у носителей разных типов крови. Агглютинация наблюдается при следующих сочетаниях:

Из этого следует, что по системе AB0 I группе свойственно абсолютное сочетание с остальными, ее носители признаны универсальными донорами. Соответственно, обладатели IV группы являются универсальными реципиентами, так как красные кровяные клетки данного типа не должны вызывать агглютинацию с плазмой носителей другого типа крови.

Поскольку при таком подходе могут возникнуть осложнения, в медицинской среде чаще всего пользуются другим методом: реципиенту переливается одногруппный материал донора при множественной кровопотере. Редко используют выше описанное правило смешивания групп.

Rh-система крови

Значимой системой крови после AB0 считается Rh (резус-фактор), открытая в 40-ые годы 20-го столетия К. Ландштейнером и К. Винером. Она представляет собой 50 антигенов, обнаруживаемых группой крови. Самыми важными признаны 6 (D, C, c, CW, E, e). Наиболее активным является D-антиген, определяющий принадлежность людей к резус-положительному (Rh+)/резус-отрицательному (Rh–) фактору. Наличие антигена говорит о Rh+ у 85% людей белой расы. У остальных 15% антиген (агглютинин) отсутствует, что свидетельствует о Rh–. В сравнении с системой AB0 у Rh отсутствуют необходимые агглютинины в плазме. Но при трансфузии материала Rh+ донора Rh– реципиенту обнаруживаются антитела - антирезус - агглютинины в крови испытуемого, которому переливали донорскую кровь. Повторение процедуры приводит к агглютинации эритроцитов, или гемотрансфузионному шоку.

Ученые пришли к выводу, что носителям Rh– можно переливать только Rh–.

Аналогичная ситуация может возникнуть у матери - обладательницы Rh– при вынашивании ребенка — носителя Rh+, когда резус-агглютиногены, оказываясь в ее организме, активно вырабатывают антитела. Как правило, первая беременность протекает успешно и заканчивается благополучным родоразрешением. По статистике при последующих вынашиваниях Rh+ плода антитела, проникая через плаценту, поражают красные кровяные клетки плода, приводя к выкидышу или гемолитической анемии новорожденных. Поэтому в качестве иммунопрофилактических мер женщинам с Rh– после первых родов вводят концентрат анти-D-антитела.

Тестирование на группу крови и резус-фактор

Знание группы крови, резус-фактора очень важно для спасения жизни в ситуациях, чаще всего связанных с большой кровопотерей или других патологических случаях, когда трансфузия является одним из основных терапевтических методов.

Результаты исследования покажут принадлежность крови человека к одной из групп системы «а-бэ-ноль», исходя из наличия антигенов на красных кровяных тельцах и антител.

Определение принадлежности к группе крови по системе АВ0 происходит по активным стандартным плазмам каждой из групп с титром 1:32 и красным форменным элементам, соответствующим стандарту. Иногда дополнительно используют плазму IV группы. Данные материалы смешивают с кровью пациента, затем следят за реакцией в течение 3 мин. К смеси плазмы с кровью с наступившим склеиванием капают 0,9% раствор хлорида натрия и ждут до 5 минут. Затем считывают агглютинацию через проходящий свет, на основании чего делают вывод о групповой принадлежности:

• отсутствие агглютинации во всех пробах отрицает агглютиноген, говоря об отношении к 0(I);
• агглютинация в плазме с пробами 0(I), В(III) указывает на агглютиноген А и А(II);
• наличие процесса склеивания красных форменных элементов в сыворотке 0(I), А(II) говорит о присутствии агглютиногена В и отношении к В(III);
• протекание агглютинации во всех исследуемых материалах показывает присутствие агглютиногенов А, В и принадлежность к АВ(IV).

В последнем случае возможна неспецифическая реакция. Для подтверждения данных смешивают стандартную сыворотку АВ(IV), кровь испытуемого и ведут наблюдение в течение 5 мин. Если склеивание эритроцитов не происходит, она имеет отношение к группе АВ(IV).

При слабо выраженной агглютинации или в случае сомнения пробу повторяют вновь.

Для тестирования резус-фактора применяют стандартный реагент с антителами к резус-антигенам, смешивая его с кровью испытуемого. После добавления через 3-5 минут физраствора перемешивают содержимое и визуально на проходящий свет определяют наличие склеивания эритроцитов и выпадения осадка. При обнаружении хлопьев красного цвета делают вывод об отношении к Rh+. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh–.

Группа крови по системе АВ0 и Rh принято указывать на одной строке, например, 0 (I)Rh+, 0 (I)Rh- и т.д.

Сдать анализ крови на групповую принадлежность и резус-фактор можно в любой клинической лаборатории. Кроме этих значений в анализе указывают совместимость, определяя материал какой группы, резус-фактора можно переливать при острой необходимости.

Наследование групп крови

Доказано, что группа крови ребенка наследуется от родителей. Существует несколько очевидных закономерностей в наследовании групповой принадлежности:

1. В семье, где один из родителей имеет 0(I), не может родиться малыш с IV(AB) группой. При этом группа второго родителя не имеет значения.
2. Мама и папа - носители 1 группы крови, значит дети родятся с аналогичной группой.
3. У родителей со 2 группой рождаются младенцы только с 1 или 2 группами.
4. Если оба супруга имеют 3 группу, то дети - носители только 1 или 3.
5. При наличии у одного из родителей типа IV(AB) не может родиться ребенок с 1 группой независимо от группы крови другого родителя.
6. При сочетании 2 и 3 групп у супругов дети могут иметь любой из возможных типов крови.

Зафиксировано, что в 1 случае на десять миллионов может произойти наследственная мутация, именуемая бомбейский феномен. Его суть в том, что дети при рождении имеют группу, которая не содержит антигены А и B, а также компонент Н. Такие люди живут обычной жизнью, сложности могут возникнуть лишь при трансфузии или установлении отцовства.

Знать свою группу крови, резус-фактор, а также совместимость с другими группами должен каждый человек. Иногда это становится решающим фактором, от которого зависит жизнь.

Вконтакте

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность. Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции. Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур. Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

• I (0) – ά, β - поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов;
• II (А) – β - на поверхности имеется антиген А и антитело β;
• III (В) – ά - поверхность содержит В с антителом типа ά;
• IV (АВ) – 00 - поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система - посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.

Разведение производится так:

Непосредственно исследование проводится таким образом:

1. На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
2. Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Правила расшифровки результатов

Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

• Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) - определение первой группы;
• Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II - определение второй;
• При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы - определение III;
• Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной - определение IV.

Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками				Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами			Группы крови
0(I)	A(II)	B(III)	AB(IV)	0(I)	A(II)	B(III)
–	–	–	-	–	+	+	0(I)
+	–	+	-	–	–	+	A(II)
+	+	–	-	–	+	–	B(III)
+	+	+	–	–	–	–	AB(IV)

Агглютинация;

– агглютинация отсутствует;

— реакцию не проводят.

Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны - синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.

	Вид цоликлонов		Группа крови
Результат агглютинации	Анти-А	Анти-В
	-	-	0(I)
	+	-	A(II)
	-	+	B(III)
	+	+	AB(IV)

IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

• Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0;
• Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования;
• Стеклянные палочки для перемешивания образцов;
• Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Видео: Определения групп крови с помощью цоликлонов

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов. Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов. При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций. Ее результат - агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе - путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор. После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256. Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования). После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

• если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
• если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном). Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I. Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

• универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
• скарификатор для получения образца для исследования;
• чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
• стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

Процесс проведения анализа с использованием методики «Эритротест»

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.