ГОСТ 10846-91

Группа С19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ЗЕРНО И ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ

Метод определения белка

Grain and products of its processing.
Method for determination of protein

ОКСТУ 9709

Дата введения 1993-06-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН ВНПО "Зернопродукт"

РАЗРАБОТЧИКИ

Г.С.Зелинский, канд. техн. наук; К.А.Чурусов, канд. техн. наук (руководитель темы); Н.М.Яскина, канд. биол. наук; М.И.Шварцман, канд. техн. наук; А.Ф.Щухнов, канд. техн. наук; Е.В.Соломонова; И.А.Вережникова; Ж.Б.Левинтон; И.Д.Звенигородская; Н.П.Левицкая; Л.П.Зельцман

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 18.12.91 N 1995

3. ВЗАМЕН ГОСТ 10846-74

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. ПЕРЕИЗДАНИЕ

Внесена поправка, опубликованная в ИУС N 6 за 2006 год

Поправка внесена изготовителем базы данных по тексту ИУС N 6 за 2006 год



Настоящий стандарт распространяется на зерно и продукты его переработки и устанавливает метод определения белка.

Сущность метода заключается в минерализации органического вещества серной кислотой в присутствии катализатора с образованием сульфата аммония, разрушении сульфата аммония щелочью с выделением аммиака, отгонке аммиака водяным паром в раствор серной или борной кислоты с последующим титрованием.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Отбор проб зерна - по ГОСТ 13586.3 .

1.2. Отбор проб крупы - по ГОСТ 26312.1 .

1.3. Отбор проб муки и отрубей - по ГОСТ 27668 .

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Мельница лабораторная марки УI-ЕМЛ, марки ЛЭМ или другой марки, обеспечивающая требуемую крупность размола.

Сито из проволочной сетки N 08 по ТУ 14-4-1374.

Весы лабораторные общего назначения с пределом допускаемой погрешности взвешивания ± 0,01 г.

Весы лабораторные общего назначения с пределом допускаемой погрешности взвешивания ± 0,001 г.

Шкаф сушильный электрический СЭШ-3М или другого типа с терморегулятором, обеспечивающим создание и поддержание температуры в рабочей зоне высушивания 100-140 °С с погрешностью ± 2 °С.

Электронагреватели или газовые горелки.

Бачок-парообразователь металлический или термостойкая колба вместимостью 2000 см.

Колбы Кьельдаля исполнения 2 вместимостью 100, 250 и 500 см по ГОСТ 25336 .

Бюретки вместимостью 25 или 50 см.

Колбы конические исполнения 2 вместимостью 250 и 500 см по ГОСТ 25336 .

Колбы мерные исполнения 1 вместимостью 500 и 1000 см по ГОСТ 1770 .

Холодильник шариковый или с прямой трубкой исполнения 3 по ГОСТ 25336 .

Каплеуловитель исполнения КО-60 по ГОСТ 25336 .

Воронки стеклянные лабораторные диаметром 25 или 36 мм, высотой 38 или 50 мм по ГОСТ 25336 .

Пробирки цилиндрические диаметром 10 мм, высотой 90 мм по ГОСТ 25336 .

Трубки стеклянные соединительные по ГОСТ 25336 .

Капельница для индикатора.

Ступки фарфоровые и пестик.

Стакан фарфоровый вместимостью 1000 см по ГОСТ 9147 .

Цилиндр мерный вместимостью 1000 см по ГОСТ 1770 .

Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204 , х. ч., и раствор серной кислоты или стандарт-титр концентрации 0,05 моль/дм.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328 , х. ч. или ч. д. а., раствор массовой концентрации 330-400 г/дм и раствор гидроокиси натрия концентрацией 0,1 моль/дм.

Кислота борная по ГОСТ 9656 , ч. д. а., и раствор массовой концентрации 40 г/дм.

Медь сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165 .

Калий сернокислый по ГОСТ 4145 .

Водорода пероксид по ГОСТ 10929 , водный раствор объемной долей 30%.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 *.
___________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000 .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 .

Метиловый красный.

Бромкрезоловый зеленый.

Селен, ч.

3. ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ

3.1. Подготовка пробы к определению

3.1.1. Из средней пробы зерна или продукта его переработки вручную или при помощи делителя выделяют (50,0±0,1) г. Зерно и крупу очищают от сорной примеси, за исключением испорченных зерен или ядер. Очищенное зерно или крупу размалывают на лабораторной мельнице так, чтобы весь размолотый продукт прошел при просеивании через сито из проволочной сетки N 08.

При размоле на мельнице зерно, влажность которого превышает 17%, предварительно подсушивают на воздухе или в одном из следующих устройств: сушильном шкафу, термостате, лабораторном сушильном аппарате ЛСА при температуре воздуха не более 50 °С.

3.1.2. Из тщательно перемешанного материала отбирают и помещают в чистую и сухую пробирку, свободно входящую в колбу Кьельдаля, поочередно две навески массой 0,3-0,7 г каждая. Пробирку с навеской взвешивают на весах с погрешностью ± 0,001 г, помещают как можно глубже в колбу Кьельдаля (во избежание распыления продукта по стенкам колбы) и осторожно высыпают продукт из пробирки. Пустую пробирку взвешивают. По разности между результатами первого и второго взвешивания устанавливают массу навески.

Для облегчения введения пробирки с навеской в колбу Кьельдаля на запаянный конец пробирки надевают резиновую трубку.

Допускается взвешивать навеску на обеззоленном фильтре размером 3x3 см. Фильтр с навеской сворачивают и помещают в колбу Кьельдаля.

Примечание. При взятии навески на обеззоленном фильтре в "холостом" определении проводят обязательное сжигание фильтра.

3.1.3. Одновременно со взятием навесок для анализа берут навески для определения влажности: зерна - по ГОСТ 13586.5 , крупы - по ГОСТ 26312.7 , муки и отрубей - по ГОСТ 9404 .

3.2. Подготовка реактивов и растворов

3.2.1. Для приготовления катализатора 1 взвешивают 10,0 г сернокислой меди, 100,0 г сернокислого калия и 2,0 г селена, помещают навеску в ступку и смесь тщательно растирают до получения однородного мелкозернистого порошка.

Для приготовления катализатора 2 взвешивают 10,0 г сернокислой меди и 300,0 г сернокислого калия, помещают навески в ступку и смесь тщательно растирают до получения однородного мелкозернистого порошка.

3.2.2. Для приготовления раствора индикатора взвешивают 0,2 г метилового красного и 0,1 г бромкрезолового зеленого; растворяют навески в 100 см 96%-ного этилового спирта.

3.2.3. Для приготовления 0,05 моль/дм раствора серной кислоты используют концентрированную кислоту по ГОСТ 25791 и титр серной кислоты в соответствии со стандартами и правилами, приложенными к комплекту.

3.2.4. Для приготовления 0,1 моль/дм раствора гидроокиси натрия используют натрия гидроокись по ГОСТ 4328 и титр натрия гидроокиси в соответствии со стандартами и правилами, приложенными к комплекту.

3.2.5. Для приготовления раствора борной кислоты массовой концентрации 40 г/дм взвешивают 40 г борной кислоты, растворяют навеску в небольшом количестве воды при нагревании, а затем раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см, объем которой после охлаждения раствора доводят до метки дистиллированной водой.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

4.1. Разрушение органического вещества

4.1.1. В колбу Кьельдаля с навеской добавляют 1,5-2,0 г катализатора 1 или 2 и осторожно вливают 10-15 см концентрированной серной кислоты. Содержимое перемешивают покачиванием колбы, добиваясь полного смачивания навески.

Допускается в колбу Кьельдаля с навеской вместо катализатора 1 или 2 добавлять 7-10 см раствора перекиси водорода объемной долей 30% и после прекращения бурной реакции приливать 7-10 см концентрированной серной кислоты.

4.1.2. Нагревание колбы проводят в вытяжном шкафу или помещении с принудительной вентиляцией.

В горлышко колбы Кьельдаля вставляют маленькую стеклянную воронку или втулку для уменьшения улетучивания паров кислоты во время нагревания.

Колбу устанавливают на электроплитке или укрепляют в штативе над газовой горелкой так, чтобы ее ось была под углом 30-45°.

Начальное нагревание колбы проводят под наблюдением при слабом накале электроплитки или на слабом пламени газовой горелки медленно, ввиду возможного образования пены, которая может подняться в горлышко колбы или даже перелиться через край.

4.1.3. После прекращения образования пены усиливают нагревание колбы и доводят содержимое ее до кипения. Дальнейшая интенсивность кипения раствора в колбе должна быть такой, чтобы пары кислоты конденсировались в средней части горлышка колбы Кьельдаля.

Во время нагревания колбы следят за тем, чтобы на стенках колбы не оставалось черных несгоревших частиц продукта. Если их обнаруживают, то смывают небольшим количеством серной кислоты, которую добавляют в колбу, или легким встряхиванием содержимого колбы.

4.1.4. Раствор в колбе кипятят до тех пор, пока он не станет прозрачным (допускается слегка зеленоватый оттенок). Затем проводят дополнительное нагревание колбы еще в течение 30 мин, после чего сжигание заканчивают.

4.1.5. Колбу охлаждают и к ее содержимому постепенно приливают 70 см дистиллированной воды, слегка взбалтывая раствор. Полученный раствор снова охлаждают.

4.2. Отгонка аммиака

4.2.1. В бачок-парообразователь 1 (см. приложение) через воронку 2 наливают дистиллированную воду, заполняя ею более половины объема бачка. Открывают кран 3 и зажим 4.

Нагревают бачок с водой на электрической плитке или газовой горелке. Присоединяют пустую колбу Кьельдаля 10 к каплеуловителю 7 и воронке для щелочи 5.

После того как вода в бачке закипит, закрывают кран 3. Включают холодильник 8, подставляют под него пустую коническую колбу 9 и в течение 5-10 мин "пропаривают" прибор.

По истечении указанного времени открывают краны 3 и 6, а зажим 4 закрывают.

4.2.2. В коническую колбу вместимостью 250 см приливают при помощи бюретки или пипетки 20 см раствора борной кислоты массовой концентрации 40 г/дм или же 25 см 0,05 моль/дм раствора серной кислоты и добавляют 4-5 капель индикатора. Вынимают пустую коническую колбу из-под холодильника и вместо нее подставляют коническую колбу с раствором борной или серной кислоты.

Колбу подставляют под холодильник так, чтобы кончик холодильника был погружен в раствор на глубину не менее 1 см.

Вынимают пустую колбу Кьельдаля и вместо нее подставляют колбу Кьельдаля с растворами.

4.2.3. Закрывают кран 6 и наливают в воронку 40 см раствора щелочи массовой концентрации 330-400 г/дм. Затем осторожно открывают кран 6 и понемногу при слабом покачивании колбы Кьельдаля приливают щелочь к содержимому колбы.

При этом наблюдается изменение цвета раствора в колбе Кьельдаля: из прозрачного он становится синим или бурым.

4.2.4. Открывают зажим 4, закрывают краны 3 и 6 и начинают отгонку аммиака, который перегоняемый паром из колбы Кьельдаля конденсируется в холодильнике и попадает в приемную коническую колбу с раствором борной или серной кислоты.

Через 10 мин коническую колбу с раствором кислоты опускают, при этом кончик холодильника не должен касаться жидкости.

Конец отгонки устанавливают при помощи лакмусовой бумажки. Для этого кончик холодильника обмывают небольшим количеством дистиллированной воды, отставляют коническую колбу из-под холодильника и под стекающие из холодильника капли конденсата подставляют лакмусовую бумажку. В случаях, когда лакмусовая бумажка не синеет, отгонку аммиака заканчивают. Если лакмусовая бумажка синеет, то приемную колбу снова подставляют под холодильник и продолжают отгонку.

4.2.5. После окончания отгонки закрывают зажим 4 и открывают краны 3 и 6.

Обмывают кончик холодильника над конической колбой дистиллированной водой и коническую колбу убирают. Колбу Кьельдаля заменяют на пустую и "пропаривают" всю систему для удаления возможных остаточных количеств аммиака.

4.2.6. Допускается при применении для сжигания навесок колб Кьельдаля вместимостью 500 см проводить отгонку аммиака без бачка-парообразователя непосредственным нагревом колбы Кьельдаля на электронагревателе. Содержимое колбы Кьельдаля перед отгонкой аммиака разбавляют 150-200 см дистиллированной воды и дальнейшие операции отгонки выполняют так, как указано в пп.4.2.2-4.2.5.

4.3. Титрование

4.3.1. При отгонке аммиака в раствор борной кислоты аммиак, содержащийся в приемной конической колбе, оттитровывают 0,05 моль/дм раствором серной кислоты до перехода окраски индикатора из зеленой в розовую.

4.3.2. При отгонке аммиака в раствор серной кислоты содержимое конической колбы (избыток 0,05 моль/дм раствора серной кислоты) титруют 0,1 моль/дм раствором гидроокиси натрия до перехода окраски в зеленую.

4.4. Определение азота в реактивах и воде

4.4.1. Одновременно с определением азота в зерне и продуктах его переработки проводят анализ на выявление загрязнения воды и реактивов азотом (холостое определение). Для этого проводят весь анализ в соответствии с требованиями разд.4, за исключением взятия навески.

4.4.2. Если для взятия навески использовался обеззоленный фильтр, то аналогичный фильтр также должен быть использован в анализе на выявление загрязнения реактивов и воды азотом.

4.4.3. Определение азота в реактивах проводят каждый раз после замены партий реактивов.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1. При отгонке аммиака в раствор борной кислоты содержание азота () в зерне или продуктах его переработки при фактической влажности в процентах вычисляют по формуле

где - масса навески, г;

- объем раствора серной кислоты, пошедший на титрование аммиака в растворе, см;

- поправка к титру 0,05 моль/дм раствора серной кислоты (при приготовлении раствора из концентрированной серной кислоты);

0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см 0,05 моль/дм раствора серной кислоты, г;

- объем 0,05 моль/дм раствора серной кислоты, пошедшего на титрование в "холостом" определении,

ГОСТ 25179-90

Группа Н19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО

Методы определения белка

Milk. Methods for determination of protein

МКС 67.100.10
ОКСТУ 9209

Дата введения 1991-01-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторским институтом молочной промышленности

РАЗРАБОТЧИКИ

О.А.Гераймович, канд. техн. наук; Е.А.Фитисов, канд. сельхоз. наук; Л.В.Андреевская

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 01.02.90 N 136

3. ВЗАМЕН ГОСТ 25179-82

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2009 г.


Настоящий стандарт распространяется на непастеризованное молоко с кислотностью не выше 20 °Т и устанавливает следующие методы измерения массовой доли белка: колориметрический, рефрактометрический и формольного титрования.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по ГОСТ 13928 . Консервирование проб не допускается.

2. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

Колориметрический метод основан на способности белков молока при рН ниже изоэлектрической точки связывать кислый краситель, образуя с ним нерастворимый осадок, после удаления которого измеряют оптическую плотность исходного раствора красителя относительно полученного раствора, которая уменьшается пропорционально массовой доле белка.

2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104 *.
_________________
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001 .

На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 53228-2008


Центрифуга для измерения массовой доли жира молока по нормативно-технической документации.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный со светофильтром для выделения спектральной области 590 нм с кюветами рабочей длины 10 мм или спектрофотометр с выделяемой длиной волны 590 нм.

Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения 2-3 ед. рН с ценой деления 0,05 ед. рН.

Термометр ртутный стеклянный с диапазоном измерения 0-100 °С, с ценой деления 0,5 или 1,0 °С, с пределом допустимой погрешности ±1 °С по ГОСТ 28498 .

Пробки резиновые конусные N 16 или 19 по нормативно-технической документации.

Штатив для пробирок.

Фильтры бумажные.

Пробирки П1, П2, П4-25 по ГОСТ 25336 .

Воронки В или ВФ по ГОСТ 25336 .

Пипетки 1-2-1, 2-2-1, 4-2-1, 5-2-1, 2-2-20 по ГОСТ 29169 .

Колбы 1-2-50, 1-2-200, 1-2-500, 1-2-2000, 2-2-50, 2-2-200, 2-2-500, 2-2-2000 по ГОСТ 1770 .

Бутыль темного стекла вместимостью 2000 см по нормативно-технической документации.

Краситель "Амидо черный 10 Б" (1-амино-2,7-бис (-нитрофенилазо)-8-оксинафталин-3,6-дисульфокислоты динатриевая соль) по ТУ 6-09-05-557*, ч.д.а.
________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, не приводятся. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке . - Примечание изготовителя базы данных.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652 , х.ч. или ч.д.а.

Натрий ортофосфат двузамещенный, 12-водный по ГОСТ 4172 , х.ч. или ч.д.а. или натрий отофосфат двухзамещенный, х.ч. или ч.д.а.

Кислота серная по ГОСТ 4204 , х.ч. или ч.д.а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328 , х.ч. или ч.д.а.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 .

2.2. Подготовка к измерениям

2.2.1. Приготовление буферного раствора

Взвешивают 31,70 г лимонной кислоты и 8,40 г ортофосфата натрия. Результат взвешивания записывают с округлением до 2-го десятичного знака. Реактивы помещают в колбу вместимостью 500 см и добавляют в нее 400 см воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 °С. Затем содержимое колбы перемешивают до полного растворения веществ и охлаждают до температуры (20±2) °С.

2.2.2. Приготовление раствора красителя

Навеску 4,60 г красителя, взвешенного с отсчетом до 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 500 см и добавляют в нее 200 см воды. Колбу нагревают до температуры не выше 70 °С и затем перемешивают содержимое ее до растворения красителя.

Раствор отфильтровывают через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 2000 см. Фильтр промывают водой до удаления следов красителя.

В эту же колбу переносят буферный раствор, приготовленный по п.2.2.1.

Содержимое колбы охлаждают до температуры (20±2) °С. Колбу доливают водой до метки, закрывают резиновой пробкой и перемешивают ее содержимое путем переворачивания колбы не менее шести раз.

Раствор должен иметь (2,3±0,1) ед. рН. Если рН раствора не соответствует данному значению, исправляют его добавлением концентрированной серной кислоты или гидроокиси натрия. Раствор, разбавленный в 50 раз, должен иметь оптическую плотность (0,82±0,02) на длине волны 590 нм в кювете с рабочей длиной 10 мм. Если оптическая плотность раствора не соответствует данному значению, то исправляют ее добавлением буферного раствора или раствора красителя.

Раствор следует использовать только после 12 ч выдержки.

Раствор должны хранить в холодильнике в бутыли из темного стекла не более 4 мес, еженедельно проверяя и исправляя значения рН и оптической плотности.

2.3. Проведение измерений

2.3.1. В стеклянную пробирку помещают пипеткой 1 см молока, приливают 20 см раствора красителя и, закрыв пробирку резиновой пробкой, перемешивают ее содержимое, переворачивая пробирку от 2 до 10 раз.

Следует избегать встряхивания, так как при этом образуется трудноразрушимая пена.

2.3.2. Помещают пробирку в центрифугу и центрифугируют при частоте вращения 25 с (1500 об/мин) в течение 10 мин или при частоте вращения 16 c (1000 об/мин) - в течение 20 мин.

2.3.3. Отбирают пипеткой 1 см надосадочной жидкости, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см, доливают колбу до метки водой и содержимое перемешивают. Аналогичным способом разбавляют рабочий раствор красителя в 50 раз.

2.3.4. Измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре оптическую плотность разбавленного раствора красителя по отношению к разбавленному содержимому мерной колбы.

2.3.5. После каждых 24 наблюдений кювету промывают буферным раствором, приготовленным по п.2.2.1.

2.4. Обработка результатов

2.4.1. Массовую долю белка , %, вычисляют по формуле

где - измеренная оптическая плотность, ед. оптич. плотности;

7,78 - эмпирический коэффициент, %/ед. оптич. плотности;

1,34 - эмпирический коэффициент, %.

2.4.2. Предел допустимой погрешности результата измерений в диапазоне массовой доли белка 2,5-4,0% составляет ±0,1% массовой доли белка при доверительной вероятности 0,80 и расхождении между двумя параллельными измерениями не более 0,013 единиц оптической плотности или не более 0,1% массовой доли белка.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов вычислений двух параллельных наблюдений, округляя результат до второго десятичного знака.

При расхождении между результатами измерений, полученными в разных лабораториях более чем на 0,1% массовой доли белка, измерение проводят по ГОСТ 23327 .

3. РЕФРАКТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

Рефрактометрический метод основан на измерении показателей преломления молока и безбелковой молочной сыворотки, полученной из того же образца молока, разность между которыми прямо пропорциональна массовой доле белка в молоке.

3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Комплект для измерения массовой доли белка, состоящий из:

рефрактометра со шкалой массовой доли белка в диапазоне 0-15%, ценой деления 0,1%;

водяной бани закрытого типа для флаконов.

Центрифуга для измерения массовой доли жира в молоке по нормативно-технической документации.

Электроплитка номинальной мощностью 1000 Вт по ГОСТ 14919 .

Колбы 1-1000-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770 .

Пипетки 1-2-1, 2-2-1, 2-2-5, 4-2-1, 5-2-1 по ГОСТ 29169 .

Флаконы из стеклянной трубки для лекарственных средств, типа ФО, вместимостью 10 см по ТУ 64-2-10.

Пробки резиновые по нормативно-технической документации.

Кальций хлористый 2-водный по ТУ 6-09-5077.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 .

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

3.2. Подготовка к измерениям

Навеску 40,0 г хлористого кальция помещают в колбу вместимостью 1000 см, приливают к ней 500 см воды и перемешивают до полного растворения соли. Содержимое колбы нагревают до температуры (20±2) °С и доводят водой до метки.

3.3. Проведение измерений

3.3.1. Наливают в 3 флакона по 5 см молока, добавляют по 6 капель раствора хлорида кальция. Флаконы закрывают пробками и содержимое их перемешивают путем переворачивания флаконов.

Помещают флаконы в водяную баню, наливая в баню воду так, чтобы ее уровень достигал половины высоты флаконов. Баню закрывают, помещают на электроплитку, доводят воду в бане до кипения и кипятят не менее 10 мин. Не открывая бани, сливают горячую воду через отверстия в крышке, наливают в баню холодную воду и выдерживают в ней не менее 2 мин.

Открывают баню, извлекают флаконы и разрушают белковый сгусток путем энергичного встряхивания флаконов.

Флаконы помещают в центрифугу и центрифугируют не менее 10 мин. Образовавшуюся прозрачную сыворотку отбирают пипеткой и наносят на измерительную призму рефрактометра 1-2 капли. Закрывают измерительную призму осветительной.

Наблюдая в окуляр рефрактометра, специальным корректором убирают окрашенность границы света и тени. Для улучшения резкости границы измерение проводят через 1 мин после нанесения сыворотки на призму, так как за это время из пробы удаляется воздух и лучше смачивается поверхность осветительной призмы.

3.3.2. Проводят по шкале "Белок" не менее 3 наблюдений. Удаляют сыворотку с призмы рефрактометра, промывают ее водой и вытирают фильтровальной бумагой.

3.3.3. Помещают на измерительную призму 2 капли исследуемого молока и проводят по шкале "Белок" не менее 5 наблюдений, так как резкость границы света и тени у молока хуже, чем у сыворотки.

3.3.4. Вычисляют среднеарифметические результаты наблюдений для сыворотки и молока.

3.4. Обработка результатов

3.4.1. Массовую долю белка в молоке , %, вычисляют по формуле

где - среднеарифметическое значение результатов наблюдения по шкале "Белок" для молока, %;

- среднеарифметическое значение результатов наблюдения по шкале "Белок" для сыворотки, %.

3.4.2. Предел допустимой погрешности результата измерений составляет ±0,1% массовой доли белка при доверительной вероятности 0,80 и расхождении между двумя параллельными определениями не более 0,1% массовой доли белка.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных вычислений массовой доли белка, округляя результат до второго десятичного знака.

При расхождении между результатами измерений, полученными в разных лабораториях, более чем на 0,1% массовой доли белка, измерение проводят по ГОСТ 23327 .

4. МЕТОД ФОРМОЛЬНОГО ТИТРОВАНИЯ

Метод применяют при условии согласия с поставщиком.

Метод формольного титрования основан на нейтрализации карбоксильных групп моноаминодикарбоновых кислот белков раствором гидроксида натрия, количество которого, затраченное на нейтрализацию, пропорционально массовой доле белка в молоке.

4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения от 4 до 10 ед. рН с ценой деления 0,05 ед. рН.

Блок автоматического титрования, аппаратурно совместимый с потенциометрическим титратором и имеющий дозатор раствора (бюретку) вместимостью не менее 5 см с ценой деления не более 0,05 см.

Секундомер механический типа СОПир 3-го класса.

Колбы 1-1000-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770 .

Пипетки 2-2-5, 2-2-20 по ГОСТ 29169 .

Воронки ВК по ГОСТ 25336 .

Стаканы В-1-50, В-2-50 по ГОСТ 25336 .

Натрия гидроокись, стандарт-титр по ТУ 6-09-2540, раствор с молярной концентрацией 0,1 моль/дм.

Формальдегид, водный раствор с массовой долей формальдегида 30% по ГФ СССР, N 619.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 .

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

4.2. Подготовка к измерениям

4.2.1. Подготовка приборов

Подключают блок автоматического титрования к анализатору согласно инструкции, прилагаемой к блоку. Затем подключают блок и анализатор к сети и прогревают их в течение 10 мин.

Заполняют дозатор блока автоматического титрования раствором гидроокиси натрия.

Согласно инструкции, прилагаемой к потенциометрическому анализатору, настраивают последний на такой диапазон измерения рН, который включал бы в себя рН=9.

Согласно инструкции, прилагаемой к блоку автоматического титрования, настраивают его на точку эквивалентности, равную 9 единицам рН, подачу раствора по каплям начиная с рН=4 и 30-секундную выдержку после достижения точки эквивалентности.

4.2.2. Определение поправки к результатам измерения массовой доли белка методом формольного титрования

Для определения поправки к результатам измерения массовой доли белка методом формольного титрования проводят одновременное измерение массовой доли белка в одном и том же образце молока методом формольного титрования и по ГОСТ 23327 .

Измерения проводят на средней пробе молока, полученной путем смешивания равных по массе образцов молока, полученных от разных хозяйств. При этом средняя проба должна быть образована не менее чем от 75% всех хозяйств - сдатчиков молока.

Измерения как по ГОСТ 23327 , так и методом формольного титрования проводят в шести повторностях.

Поправку , %, вычисляют по формуле

где - среднеарифметическое значение массовой доли белка, полученное по ГОСТ 23327 , %;

- среднеарифметическое значение массовой доли белка, полученное формольным титрованием, %.

Определение поправки проводят не реже одного раза в декаду.

4.3. Проведение измерений

4.3.1. В стакан помещают 20 см молока и стержень магнитной мешалки. Стакан устанавливают на магнитную мешалку, включают двигатель мешалки и погружают электроды потенциометрического анализатора в молоко. Включают кнопку "Пуск" блока автоматического титрования, а спустя 2-3 с, кнопку "Выдержка". Раствор гидроксида натрия при этом начинает поступать из дозатора блока в стакан с молоком, нейтрализуя последнее. По достижении точки эквивалентности (рН=9) и истечении времени выдержки (30 с) процесс нейтрализации автоматически прекращается, а на панели блока автоматического титрования зажигается сигнал "Конец". После этого отключают кнопки "Пуск" и "Выдержка", определяют количество раствора щелочи, затраченной на нейтрализацию молока, до внесения формальдегида, и вносят в стакан 5 см формальдегида.

По истечении 2-2,5 мин вновь включают кнопки "Пуск" и "Выдержка". По окончании процесса определяют общее количество раствора, затраченного на нейтрализацию.

4.3.2. Параллельно проводят контрольный опыт по нейтрализации смеси 20 см воды и 5 см раствора формальдегида.

4.4. Обработка результатов

4.4.1. Массовую долю белка , %, вычисляют по формуле

где - общее количество раствора, израсходованное на нейтрализацию, см;

- количество раствора, израсходованное на нейтрализацию до внесения формальдегида, см;

- количество раствора, израсходованное на контрольный опыт, см;

0,96 - эмпирический коэффициент, %/см;

- поправка к результату измерения массовой доли белка, %.

4.4.2. Предел допустимой погрешности результата измерений в диапазоне массовой доли белка 2,2-4,0% составляет ±0,15% массовой доли белка при доверительной вероятности 0,80 и расхождении между двумя параллельными измерениями не более 0,2% массовой доли белка.

За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных вычислений, округляя результат до второго десятичного знака.

При расхождении между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях более чем на 0,15% массовой доли белка, измерение проводят по ГОСТ 23327 .



Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
Молоко и молочные продукты.
Общие методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: Стандартинформ, 2009